KALORIMETRIE
CALNEOS ULTIMATE DSC – NOVÉ DSC S VÝJIMEČNOU CITLIVOSTÍ www.calneos.com Firma Calneos vyvinula nový diferenciální skenovací kalorimetr ULTIMATE DSC, který eliminuje nedostatky dosud běžně dostupných přístrojů – velké vzorky a pevně uchycené kelímky, které se obtížně čistí. Nový přístroj je schopen získat kvalitní data z velmi malých vzorků umístěných ve vyjímatelných kelímcích. Schopnosti přístroje jsou demonstrovány na dvou příkladech analýzy proteinů.
Úvod V biochemickém, biofyzikálním nebo farmaceutickém výzkumu jsou proteiny důležitými subjekty pro vývoj nových léků nebo léčebných přípravků. Pro příslušný vývoj je potřeba znát parametry stability těchto proteinů, jako například teploty denaturace zkoumaných proteinů, stejně jako energii spojenou s denaturací (denaturační entalpii a teplotu). Technologií, která se nejčastěji používá pro zjišťování těchto termody- namických parametrů, je diferenciální skenovací kalorimetrie (DSC). Hlavním problémem této technologie ovšem je velké množství proteinu, které je nezbytné pro získání použitelných výsledků: až 1 ml na experi- ment, a to i proteinů, které může být velmi drahé vyrobit. Z tohoto důvodu firma Calneos vyvinula přístroj ULTIMATE DSC, který využívá vlastní patentová řešení a umožňuje měření vzorků o hmotnosti menší než 100 µl ve vyjímatelných kelímcích. Jednou z výhod je drastické zmenšení množství vzorku, potřebného pro získání použitelných termogramů. Další výhodou je odstranění únavných a občas nespolehlivých čisticích procedur. Patentovaný systém teplotní regulace slouží k velmi přesnému řízení teploty v rozsahu –50 až 160 °C s rychlostí až 10 K/min Obr.1: Měřicí komora přístroje Calneos ULTIMATE DSC
ULTIMATE DSC byl naprogramován na provedení teplotního nárůstu z 20 °C na 95 °C při rychlosti ohřívání 1 °C/min. Získané termogramy jsou na obr. 3. Obr. 2: Termogramy vzorků s různými koncentracemi lysozymu
Obr. 3: Termogramy vzorků s různými koncentracemi RNázy
Termální denaturace lysozymu Experiment
100 µl vzorky několika roztoků lysozymu v PHB pufru byly umístěny do 100 µl kelímků. Byly použity různé koncentrace reprezentující různá množství analyzovaného lysozymu. Referenční kelímek byl naplněn stejným objemem PHB pufru. ULTIMATE DSC byl naprogramován na provedení teplotního nárůstu ze 40 °C na 95 °C při rychlosti ohřívání 1 °C/min. Získané termogramy jsou na obr. 2. Termální denaturace RNázy Experiment Bylo připraveno několik pufrovaných roztoků bovinní RNázy (50 mM fosfátu Ph 7,3 150 mM NaCl) o různých koncentracích. Do krimpo- vaných měřicích kelímků bylo umístěno 50 až 80 µl těchto roztoků. Odpovídající analyzované hmotnosti RNázy byly mezi 10 a 200 µg. Referenční kelímek byl naplněn stejným objemem roztoku pufru.
Závěr ULTIMATE DSC umožňuje měření entalpie a teploty denaturace 10 až 200 µg bovinní RNázy u vzorků o objemech mezi 50 a 80 µl. Tyto použité objemy vzorků jsou, stejně jako u analýzy denaturace lysozymu, 5 až 10x menší než vzorky potřebné pro analýzu jinými komerčně dostupnými přístroji, které vyžadují objemy mezi 350 a 1000 µl. Každý termogram je získán za méně než 60 min., což výrazně urych- luje analytiku vzorků. ULTIMATE DSC výrazně šetří množství vzorku a umožňuje rychlejší práci. Pro další úsporu lidské práce je k dispozici i automatická verze analy- zátoru se zásobníkem pro až 22 vzorků. Z podkladů firmy Calneos přeložil Ing. Marek ČERNÍK, uniexport@uniexport.co.cz, www.uniexport.co.cz
9
CHEMAGAZÍN • 1 / XXXIV (2024)
Made with FlippingBook Ebook Creator